Rôles du Proliferating Cell Nuclear Antigen et de p21/waf1, protéines régulatrices du cycle cellulaire dans l'apoptose du polynucléaire neutrophile : Intérêt potentiel dans la modulation de l'inflammation

Résumé : Notre laboratoire s'intéresse à la régulation de la balance survie/apoptose du polynucléaire neutrophile, phénomène important dans la résolution de l'inflammation. En effet, le polynucléaire neutrophile a un rôle essentiel dans la défense infectieuse mais il possède également un fort potentiel pro-inflammatoire, à cause des médiateurs hautement toxiques qu'il peut libérer lorsqu'il est stimulé. Le "Proliferating Cell Nuclear Antigen" (PCNA) est une protéine de 36 kDa conservée au cours de l'évolution. C'est une protéine indispensable à la prolifération cellulaire de par son rôle dans la réplication et la réparation de l'ADN. L’implication de PCNA dans la régulation de l’apoptose a également été mis en évidence mais cette propriété de PCNA est jusqu’à présent restreinte aux cellules proliférantes. De manière intéressante, la présence de PCNA dans le cytosol des polynucléaire neutrophiles, cellules en fin de différenciation et qui ne prolifèrent pas, a été observée au laboratoire. L’objectif de mon travail a porté sur l’étude des fonctions de PCNA dans la balance survie / apoptose du neutrophile ainsi que son mécanisme d’action. L'analyse in vitro des polynucléaire neutrophiles isolés de prélèvements sanguins de sujets sains a permis d’identifier une nouvelle fonction de PCNA: un rôle anti-apoptotique dans le cytosol du polynucléaire neutrophile. En effet, nous avons montré une corrélation entre la survie du polynucléaire neutrophile et l’expression accrue de PCNA dans son cytosol. Cette observation est vraie pour une apoptose constitutive ou pharmacologique (induite par la gliotoxine, inhibiteur de la voie NFκB ou par l'anti-Fas, agissant par la voie des récepteurs de mort). Nous avons ensuite analysé les mécanismes par lesquels PCNA est anti-apoptotique. Le peptide "p21 carboxy-terminal" provenant de l’inhibiteur de kinases cycline-dépendantes p21, augmente l'apoptose du polynucléaire neutrophile en entrant en compétition avec des partenaires de PCNA. Nous avons également identifié de nouveaux partenaires de PCNA dans le cytosol des polynucléaires neutrophiles par des approches de co-immunoprécipitation, en particulier les pro-caspases-3, -8, -9 et -10. PCNA séquestrerait les pro-caspases et aurait ainsi un rôle dans la survie du polynucléaire neutrophile. Le rôle anti-apoptotique de PCNA a été confirmé dans des cellules myéloïdes (PLB-985) différenciées en polynucléaire neutrophiles et stablement transfectées avec l’ADN complémentaire de PCNA. Le mutant de PCNA dans le domaine interdomain-connecting loop (ICL) a été également transfecté dans les cellules PLB- 985. Après différenciation de ces cellules en polynucléaire neutrophiles, ce mutant, contrairement à la protéine sauvage, ne présentait pas l'activité anti-apoptotique. Ces résultats suggèrent que la fixation de partenaires protéiques sur le domaine d'interaction ICL pourrait être responsable de l'activité anti-apoptotique de PCNA. Grâce à la même approche, nous avons montré l'effet pro-apoptotique de la protéine p21 dans les cellules PLB-985 différenciées en polynucléaire neutrophiles. Mon projet a permis l'identification de nouvelles protéines dont l'expression est modulée au cours de l'apoptose du polynucléaire neutrophile. Nous avons déterminé les fonctions des protéines PCNA et p21 dans le cytosol des polynucléaire neutrophiles, respectivement anti-apoptotique et pro-apoptotique. Ces résultats permettent donc une meilleure compréhension des mécanismes de l’apoptose des polynucléaires neutrophiles et donc, par voie de conséquence, potentiellement de nouvelles voies de recherche à explorer pour des traitements anti-inflammatoires.
Type de document :
Mémoire d'étudiant
Sciences du Vivant [q-bio]. 2013
Liste complète des métadonnées

https://hal-ephe.archives-ouvertes.fr/hal-01491544
Contributeur : Julie Mocek <>
Soumis le : vendredi 17 mars 2017 - 09:33:55
Dernière modification le : mardi 14 novembre 2017 - 15:22:02
Document(s) archivé(s) le : dimanche 18 juin 2017 - 12:32:24

Identifiants

  • HAL Id : hal-01491544, version 1

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Citation

Julie Mocek. Rôles du Proliferating Cell Nuclear Antigen et de p21/waf1, protéines régulatrices du cycle cellulaire dans l'apoptose du polynucléaire neutrophile : Intérêt potentiel dans la modulation de l'inflammation. Sciences du Vivant [q-bio]. 2013. 〈hal-01491544〉

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